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顯微鏡從興起發(fā)展到現(xiàn)在已經(jīng)變成各類研究領(lǐng)域的有利工具,為疾患探討、材料檢測(cè)等提供充分的協(xié)助。在顯微鏡下,樣本并不是經(jīng)常便于觀察,對(duì)例如未染色的病菌、薄組織切片和活細(xì)胞這樣的低飽和度樣本開展探討,假如我們換種觀察形式,問題通常就可得到解決。
那么如何做到暗場(chǎng)顯像呢?經(jīng)過蔡司顯微鏡剖視圖,我們能夠看見,聚光鏡以高度角將一個(gè)光錐瞄準(zhǔn)樣本,如此部分光線就不可能直接進(jìn)物鏡。經(jīng)過樣本的光被光學(xué)不連續(xù)物,如細(xì)胞膜、細(xì)胞核和內(nèi)部的細(xì)胞器的透射、散射和折射,再度進(jìn)到物鏡,隨后該樣品就可以被看作是在黑色背景上的一個(gè)明朗的物體。
遺憾的是,物體散射的光會(huì)干擾顯像,進(jìn)而減少飽和度、模糊樣本關(guān)鍵點(diǎn)。另外,樣本中的灰塵和碎片也對(duì)生成的圖像有干擾。另外,較薄的貼壁細(xì)胞通常信號(hào)比較弱,而較厚的植物和動(dòng)物組織會(huì)將過多的光線重新定向到物鏡內(nèi),如此將減少顯像的飽和度,因此暗場(chǎng)顯像對(duì)樣本的要求比較高。
蔡司顯微鏡經(jīng)過原理圖,我們很容易發(fā)覺差別顯像的重點(diǎn)在于差別環(huán)的搭配,聚光鏡中必須和差別物鏡的差別環(huán)搭配。當(dāng)蔡司顯微鏡觀察或顯像培養(yǎng)的活細(xì)胞時(shí),差別是一種很好的增強(qiáng)飽和度的方法,但通常會(huì)造成邊緣特征輪廓周邊發(fā)生光暈,而這一些光暈是光學(xué)偽影,會(huì)減少邊界關(guān)鍵點(diǎn)的可見性。
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